標準的な添加方法 - サイエンスフォーラム (2024)

化学者の皆さん、こんにちは。

仕事で難しい問題があります。

私たちは Hplc 分析に取り組んでいます。測定対象成分はエリスロマイシンです。通常、私たちは常に外部標準を使用するため、単純に検量線を作成し、その中で製品を測定します。

この中で単一の原料を測定するのであれば問題ありません。

エリスロマイシンを単純な粉末で測定する必要がある場合、これは問題にはなりません。

ただし、非常に想像力豊かな組成の粉末もあり、エリスロマイシンも含まれています。これを測定すると、予想した量の約 65% であることが分かりました。

ここフォーラムの rwwh のおかげで、標準版の方法がわかりました。これをこのパウダーに塗ってみました。測定は外部標準の範囲内で行われました。

その結果、粉末に Ery 標準物質 1 mg を加えた場合、含有量は 0.85 mg しか増加しませんでした。これは回復率が85%ということですか？

でも、標準添加法の場合は検量線は必要ありませんよね？

スタンダードを3段に追加しました。これらにより、面積が直線的に増加しました。この線をサンプルに拡張すると、実際に期待した HVH エリスロマイシンの約 70% しか見つかりません。

その理由は何でしょうか?次のステップは何ですか??

問題の粉末と同じ組成でエリスロマイシン成分を含まない粉末を作成し、追加するか実験する必要がありますか?これからどのような追加情報が得られるでしょうか?

何をするか？？？？？

私の理解が正しければ、未知のサンプルに 3 つの異なる濃度でエリーを加えたということでしょうか?これは私にとっては非常に正しいように思えます。なぜなら、この方法で (できれば) 原点を通らない直線的なキャリブレーション ラインが得られるからです。濃度軸上の切片が実際の濃度になります。あなたのモンスターのエリーに。

今度は回復率 70% という問題が発生しました。しかし、これは私にはそれほど極端に低いとは思えません。私が携わっている環境アプリケーションでは、50% がちょうど許容範囲であると考えていますが、もちろん、すべてはお客様の期待がどの程度高いかによって異なります。マトリックス効果とエリーからの信号の抑制に対処しているのではないかと思います。もちろん、標準ではこれを心配する必要はありませんが、実際のサンプルではこれは避けられません。

考えられる解決策は 2 つだけです。

a) ドロップするまで検証を繰り返します。

b) サンプル処理の開始時に内部標準を追加します。内部標準が正しく選択されていれば、たとえば約 70% についても検出されます。その後、絶対ピーク面積ではなくピーク比 (ピーク面積 Ery/ピーク面積 IS) を使用してキャリブレーションすると、回復のために自動的に補正され、結果の信頼性が高まります。

標準添加法の検量線も必要です。違いは、このキャリブレーション ラインをマトリックスに追加するだけです。これを行うと、高すぎたり低すぎたりすることはありません。標準の加算方法と釘打ちや内部標準の加算を混同しているのではないかと思います。

こんにちは、ナポレオンさん

標準の加算方法と釘打ちや内部標準の加算を混同しているのではないかと思います。

これを行うと、高すぎたり低すぎたりすることはありません。

何を言っているのか理解できないので、本文の上記 2 つの部分を説明してもらえますか。

アルジャンさん、こんにちは。

あなたが書く：

マトリックス効果とエリーからの信号の抑制に対処しているのではないかと思います。もちろん、標準ではこれを心配する必要はありませんが、実際のサンプルではこれは避けられません。

私が標準の加算方法を使用するのはまさにこのためです。次に、単純に抑制が存在すると仮定しますが、基本的にサンプルに追加する検量線は、抑制が線形であることを示しています。もちろん、サンプルは校正線よりも下で測定されます。

このためにどんな間違いを犯す可能性がありますか？

あなたが書く：

今度は回復率 70% という問題が発生しました。しかし、これは私にはそれほど極端に低いとは思えません。私が関わっている環境アプリケーションでは、50% がちょうど許容できると考えていますが、もちろんそれはあなたの期待がどの程度高いかによって決まります。

回収率の概念は、外部検量線と比較した hvh 成分を指します。

標準的な添加方法を適用する場合、回復はなく、探している成分を 100% 見つける必要があります。

反応がとても気になる

こんにちは、ハリー

Napoleon1981 は次のように書きました。標準添加法の検量線も必要です。違いは、このキャリブレーション ラインをマトリックスに追加するだけです。これを行うと、高すぎたり低すぎたりすることはありません。標準の加算方法と釘打ちや内部標準の加算を混同しているのではないかと思います。

こんにちは、ナポレオンさん

標準の加算方法と釘打ちや内部標準の加算を混同しているのではないかと思います。

これを行うと、高すぎたり低すぎたりすることはありません。

何を言っているのか理解できないので、本文の上記 2 つの部分を説明していただけますか。

確かに、標準的な添加方法では、検体が存在する場合、検量線は原点を通過しません。検出器の線形応答では、y= ax+b が適用されます。 (a) したがって、線の傾きは複数の濃度で校正することによってのみ決定できます。

編集: リカバリについてはまだ心配する必要はありません。適切に調整しないとリカバリを決定できないからです。一度に一粒子ずつ取り組んでいると、あなたは不必要に自分自身を狂わせてしまいます。

申し訳ありませんが、回復がどのようなものかをまだ正確に理解していないと思います。何と比べて回復??

ナポレオン、粒子ごとに取り組むとはどういう意味ですか。もちろん、研究では粒子ごとに取り組むことが常に最良の方法です。しかし、私の問題は正確に何を意味するのでしょうか？

ご挨拶と感謝を申し上げます。

ハリー

親愛なるハリエル様

申し訳ありませんが、私の若々しい熱意で、完全に明確ではなかったかもしれません。結局のところ、これは私の最初の投稿に過ぎなかったので...

いくつかの誤解を正す試みです。

最初の点については、標準加算を使用することはまったく間違いではありませんが、私はそのように言ったことはありません。標準的な追加が推奨される場合もあります。この分析を日常的に適用したい場合は、少し面倒でコストがかかります。そのため、内部標準を追加する方が少し現実的です。でも、標準加算について悪く言うのはやめてください！

2 番目の点について: 元の質問で、70% (場合によっては 65%、場合によっては 85%、ただし、これは純粋に分析上のばらつきである可能性があり、低レベルで測定するかどうかによって異なります) が見つかったと推定していることは理解できたと思います。追加または予想されました。これが私が回復と呼んでいるものです（「回復」という言葉にはさまざまな解釈があることは認めます）。標準加算を使用する場合でも、内部標準または外部標準を使用する場合でも、常に回復または回復に対処する必要があります。解析手順全体のどこかで損失、変換、劣化、信号抑制などが発生すると、予想よりも小さな信号が測定されることになります。

ただし、標準加算 (および内部標準加算) では、追加した量もこの影響を受けるため、すべてが相互に完全に相殺されます (実際、この方法では回復を定量化できません。それができるのは外部標準加算のみです)。キャリブレーションまたは回収標準を追加することによっても可能ですが、これにはさらに時間がかかります)

これでもう少しわかりやすくなると思いますか？

こんにちは、アルジャン

最初の点については、標準加算を使用することはまったく間違いではありませんが、私はそのように言ったことはありません。標準的な追加が推奨される場合もあります。この分析を日常的に適用したい場合は、少し面倒でコストがかかります。そのため、内部標準を追加する方が少し現実的です。しかし、標準加算については悪いことではありません

標準加算と「内部標準の加算」の基本的な違いは何ですか

通常の外部標準を使用した校正ラインから始まる一連の標準添加を行うことにより、85% の回収率が得られました。たとえば、そのシリーズの原料に 1 mg エリを追加すると、面積が 19 増加します。同じシリーズの 1 mg エリを問題の粉末に追加すると、面積が増加します。わずか 16 の 16 /19 = 0.85

私は純粋に標準加算を調べて、言及された 65% を見つけました。

上で書いたように、マネージャー エリーあたりの面積増加は 16 でした。これはすべてのレベルの追加で 16 でした。非常に直線的です。

問題の粉末では、ery を添加しない場合、面積は 365 でした。

365 / 16 = 22,75

ただし、この粉末には35 mgrのエリーが含まれています。

22.75 / 35 = 0.65

こんにちは、ハリー

こんにちは、ハリー、

標準添加とは、分析対象物をサンプルに、できれば異なる濃度レベルで添加することを意味します。このようにして、サンプル内にキャリブレーション ラインを作成し、考えられるすべての妨害効果を一度に補正します。

内部標準については、他のトピックですでに説明されています内部標準。簡単に概要を説明すると、内部標準 (略して IS と呼ばれる) は、極性、分子量、抽出物中での挙動、インジェクター、カラムなどの点で分析対象物と非常に強い類似性を示す物質/成分です。もちろん、分析対象物の分析を妨げることはありません。 GC-MS アプリケーションでは、分析物の重水素化または炭素 13 同位体がよく使用されます。

サンプルにどれだけの IS を追加するかを正確に知ることができます。分析物の応答を IS の応答で割ると、相対応答または RR と呼ばれるものが得られます。 Y 軸上のピーク面積を使用してキャリブレーション ラインを作成する代わりに、Y 軸上の RR を使用してキャリブレーション ラインを作成できるようになりました。このようにして、分析物の応答を IS の応答に関連付けます。このようにして、IS は分析対象物とまったく同じように反応すると想定されているため、サンプル前処理のどこかで注入の小さな差異や損失を補正できます (「予想される」と言っていますが、非常に残念なことに、これは理論上は優れていますが、実際には時々何か違うこと）。追加の条件は、conc を持っていることです。から IS までは、校正標準も含めて常に同じです。これは、標準的な追加方法とは対照的です。これは、標準添加剤の大きな強みでもあります。つまり、IS は 1 つの濃度レベルでのみ存在し、すべてのサンプルに存在するのに対し、標準添加剤は濃度範囲全体をカバーするということです。

Arjan1793 さんは次のように書きました:こんにちは、ハリー、

標準添加とは、分析対象物をサンプルに、できれば異なる濃度レベルで添加することを意味します。このようにして、サンプル内にキャリブレーション ラインを作成し、考えられるすべての妨害効果を一度に補正します。

好ましくはありませんが、そうでないと、Y 軸との交点を計算するための方程式を設定できなくなります。

こんにちは、ハリー、

標準添加とは、分析対象物をサンプルに、できれば異なる濃度レベルで添加することを意味します。このようにして、サンプル内にキャリブレーション ラインを作成し、考えられるすべての妨害効果を一度に補正します。

好ましくはありませんが、そうでないと、Y 軸との交点を計算するための方程式を設定できなくなります。

@ナポレオン

あなたは全くその通りですが、標準添加を分析対象物の 1 回限りの添加と理解する人もいます。たとえば、x ppb の物質 X を含むサンプルがあり、それに 10 ppb の物質 X を追加するとします。このサンプルを分析して 12 ppb が検出された場合は、もともと 2 ppb が含まれていたと考えることができます。

しかし、繰り返しますが、あなたは完全に正しいです。上記の方法は本来あるべきものではありません。

または、応答が分からない場合でも、実際にはもっと便利です。

サンプルだけを測定すると、600 という値が得られます。

サンプル + 10mg/l 物質 X を測定すると、測定値は 700 になります。

次に、2 つの未知数を含む 2 つの方程式が得られます。

A(x + 10) = 700、Ax = 600。

この場合、応答は 10、x = 60 mg/l であることがわかります。

上記の 3 つの回答は非常に素晴らしく、非常に明確です。

しかし、私が得た、そして私の考えがまだ定かではない結果を詳しく見ていただけませんか。

これらについてはここでもう一度触れます。

通常の外部標準を使用した校正ラインから始まる一連の標準添加を行うことにより、85% の回収率が得られました。たとえば、そのシリーズの原料に 1 mg エリを追加すると、面積が 19 増加します。同じシリーズの 1 mg エリを問題の粉末に追加すると、面積が増加します。わずか 16 の 16 /19 = 0.85

問題の粉末の最終結果は外部標準法を使用したものであるため、標準から検量線を作成し、最終生成物を約 25 mgr Ery で測定するだけです。

私は純粋に標準加算を調べて、言及された 65% を見つけました。

上で書いたように、マネージャー エリーあたりの面積増加は 16 でした。これはすべてのレベルの追加で 16 でした。非常に直線的です。

問題の粉末では、ery を添加しない場合、面積は 365 でした。

365 / 16 = 22,75

ただし、この粉末には35 mgrのエリーが含まれています。

22.75 / 35 = 0.65

もちろん、製品に含まれるエリーが少なすぎるように思えますが、これは 10 回チェックされているため、現時点では除外したいと思います。

なお、外部標準法で使用するery原料は適切に測定されています。したがって、品質は良いものでなければなりません!!!!

解決できないので、よく見ていただけますか (時間がかかることは承知しています。よろしくお願いします)。

ところで、次のフォーラムメンバーの集まりはいつですか??とても楽しそうです

rwwhさんが書きました:または、応答が分からない場合でも、実際にはもっと便利です。

サンプルだけを測定すると、600 という値が得られます。

サンプル + 10mg/l 物質 X を測定すると、測定値は 700 になります。

次に、2 つの未知数を含む 2 つの方程式が得られます。

A(x + 10) = 700、Ax = 600。

この場合、応答は 10、x = 60 mg/l であることがわかります。

改めて読んでみると、モンスターを1体しか育てていないので、確かにその通りです。ただし、私が言いたかったのは、加算を含むか除外して少なくとも 2 点が必要だということです。